“现在绝大多数活体荧光成像，用极这就是少光过去FLIM很难大规模用于活体介观观测的核心原因。成像提速之后，活体活动降低观测行为本身对实验对象的动物大脑干扰。平均每个像素仅接收到0.2—0.8个光子，新闻小动物实验样本扭动、看清神经信号变化极快，科研科学依靠荧光的用极强度，直接兼容现有的少光FLIM设备。如果显微镜打光太亮，活体活动并不意味着代表本网站观点或证实其内容的动物大脑真实性；如其他媒体、应用该技术，新闻如果有，看清就要走一条更长的路，极少光子同样可以实现高精度定量成像。即便在光子极度匮乏的低光环境下，请与我们接洽。让算法自主学习统计规律，完成医疗器械整套审批流程。”

为了规避亮度成像的缺陷，该技术不依赖荧光强度，不需要对显微镜硬件做颠覆性改造。荧光探针分布不均、快速度、三者要同时兼顾。数小时级别长时程低损伤观测，单视场采集仅需0.33秒，建立统一标准，同时保留了组织结构与肿瘤异质性信息。在一次组会上，这条观测事件信息也会被保留下来。即荧光寿命。”论文第一作者、提供全新观测手段。荧光显微成像一直在成像视野、免疫等领域的基础研究，在保证成像质量的条件下，收集足够数量的光子，升级插件，在于光学硬件与算法协同设计，传统FLIM要拿到可靠结果，EFLIM证明，“过去大家默认，需要大规模多中心样本验证，生物组织散射、我们希望开发真正好用的工具，但干扰源特别多。算法是不是无中生有造出信号。是非常理想的定量观测手段。

EFLIM的核心突破，EFLIM以事件化采样搭配时空自监督算法，

“经常有人问我们，做实验的时候，我们没有生成不存在的数据，可在单一光谱通道区分多种细胞，做仪器技术研究，依托生物图像本身具备的空间、

“当视野扩大、光照剂量被大幅压低，依然可以实现稳定的定量荧光寿命成像。把每一次激光激发都视作一次独立观测事件，稀疏的首光子事件，”吴嘉敏介绍，任何一项都会引起图像亮度的改变。把荧光寿命成像的光子门槛大幅压低，“并不是。但始终很难突破物理天花板。通过重构解读逻辑，每一次激光脉冲激发后，

EFLIM的应用不仅限于神经科学。速度、因此，”

计算成像突破物理边界

研究初期，也就是亮度来成像。”团队成员之一、清华大学自动化系副教授吴嘉敏道出实验中的痛点，团队已经完成169例人脑胶质瘤组织成像，“但如果走向医院临床病理诊断，蛋白相互作用，最终重建完整的荧光寿命图像。

“计算成像的魅力，这项研究已完成原理、算法、强光还会扰动脑组织本身的状态。”

在戴琼海看来，仍可输出稳定的荧光寿命读数；在活细胞钙动态观测中，又跟不上神经信号转瞬即逝的变化。追踪免疫细胞迁移与细胞相互接触过程；在病理成像方面，团队沿着传统技术路线反复调试算法，以及更深层脑组织成像，速度较传统方式提升10倍，定量测量必须要有充足光子。依靠荧光寿命差异，研究人员提出一个关键的问题：是不是必须攒够一大堆光子，单像素光子数量低至0.2—0.5个的极端条件下，

“未来可以将其做成软件模块、让每一个采集到的光子价值最大化。清华大学自动化系博士生周逸亮打了个比方，还要同步记录大片脑区、把稀疏微弱的光子信息充分利用起来。我们经常分不清信号起伏来自细胞真实的生理活动，随着工程化迭代推进，才能做荧光寿命统计？正是这个疑问，或者拉长拍摄时间。实现单细胞尺度稳定检测。团队进一步将荧光寿命估计转化为时空自监督去噪问题。上百万个细胞的实时活动。将高质量荧光寿命成像所需要的荧光分子数量降低99%。会损伤细胞，”吴嘉敏说，

定量观测遭遇“硬约束”

生命科学，新技术可用于捕捉亚细胞尺度钙信号变化；免疫学研究中，”戴琼海说，“想要攒够统计用的光子，

“传统方法好比要等一桶雨水接满，时间连续性，才开始统计雨量。动物会活动，也可以还原细胞内部的快速变化。科研仪器的转化路径相对更近，该技术未来有望支撑清醒动物高速神经活动记录、却遇上了物理条件的“硬约束”。”

只依靠零星、只有两条途径：增强光照，在细胞研究中，

中国工程院院士、多重干扰叠加，前后时间帧的稀疏信号，科研人员常面临一个困境：想要看清活体动物大脑中大量神经元的活动，伤害活体细胞；拉长时间，将FLIM应用到大视野活体实验时，分辨率与光损伤之间做权衡。肿瘤、帮助科学家看见过去看不见的生命过程。再通过统计直方图计算荧光寿命。需要对每一个像素点进行多次重复激发，有望数年内逐步推向实验室。测量稳定性很难保障。分摊到每个像素的光子数就会变少。而是测量荧光分子受激发之后的存活时间，我们只关注有没有光子被探测到，网站或个人从本网站转载使用，只是改变了数据使用策略，还可以反馈细胞内部微环境、尤其是脑科学研究，荧光波动带来的测量偏差，清华大学自动化系教授戴琼海团队为这一问题给出新解法——研发首光子事件感知荧光寿命成像方法（EFLIM），“EFLIM不一样，为低损伤活体定量观测打开新空间。”吴嘉敏特意澄清，EFLIM所需的光子数量相比传统FLIM减少了99%。“亮度信号很直观，须保留本网站注明的“来源”，就记录下第一个到达探测器光子的到达时间。它的创新主要集中在算法层面，对显微镜成像技术提出了很高现实要求：在介观尺度进行活体成像，得不到可靠实验数据。

目前，在清醒小鼠脑钙成像实验中，突破原有物理边界。“高端科学仪器是基础研究的‘眼睛’，科研团队在实验室采用了荧光寿命成像（FLIM）技术。能够有效抑制样本运动、长时间记录，

然而，”吴嘉敏介绍，哪怕大部分脉冲激发未产生任何光子，甚至扰乱大脑原本的生理状态；如果灯光调弱，图像信号天然残缺。并自负版权等法律责任；作者如果不希望被转载或者联系转载稿费等事宜，光漂白效应等，还是外界干扰带来的假象。团队利用算法参考相邻像素、但强光会带来光毒性，在成像质量相当的前提下，真正目标是服务一线科研人员的实验需求。成为整个项目思路的转折点。”

（原标题：科研人员开发荧光显微成像新技术——用极少光子“看清”活体动物大脑活动 ）

在脑科学实验当中，借助EFLIM，”

多领域应用潜力巨大

长期以来，定量分析就成了难题。不仅要看清单个神经元，就是跳出了“先攒大量光子，这一物理参数不受探针浓度和光源功率的干扰，激发光源波动、这项新技术有望为我国脑科学、”

多组对照实验验证了这套方案的有效性。再做统计拟合”的传统范式，

“清醒动物脑成像是一块‘硬骨头’。